Методы лабораторной диагоностики

Содержание

Клинико-лабораторная диагностика

Методы лабораторной диагоностики

Лабораторная диагностика

Гистологическое исследование легких

Гистологическое исследование легких помогает врачу точно определить характер заболевания и узнать природу новообразований в тканях этого дыхательного органа. Прочитав эту статью, вы узнаете об особенностях гистологического исследования легких, причинах назначения процедуры и способах ее выполнения.

Эшерихия коли в мазке – причины, симптомы, лечение

Эшерихии (кишечная палочка) – грамотрицательные палочкообразные бактерии, которые является условно-патогенной флорой человеческого организма.

Обычно ее представители обитают в кишечнике, но во время различных патогенных процессов в теле они способны увеличить «территорию» своего заселения. В гинекологических мазках представителей энтерококков найти достаточно непросто.

При бактериологическом исследовании они образуют цепочкообразные колонии, что порой приводит к неверному результату исследования – стрептококковая инфекция.

Иммунологический анализ крови

Кровь всегда чутко реагирует на изменения в организме, особенно болезненные, поэтому для диагностики всех заболеваний обязательно назначают анализ крови – иммунологический, биохимический, общеклинический («из пальца»). Что может выявить иммунологический анализ? Список заболеваний, для диагностики которых его назначают, очень широк и многообразен. Важным качеством этого анализа является точность.

Анализ мокроты общий

Мокротой называют особый патологический секрет, вырабатываемый в легких и вызывающий кашель, с помощью которого, происходит его выведение из организма.

Направление на общий анализ мокроты выдается в тех случаях, когда у лечащего врача имеются подозрения на какое-либо заболевание легких С помощью лабораторных исследований, удается довольно точно диагностировать причину, вызывающую подобные симптомы и назначить соответствующее лечение.

Учитывая высокую точность этих изысканий, исследование мокроты на общий анализ представляется незаменимой с терапевтической точки зрения процедурой, позволяющей своевременно обнаружить и начать лечение даже серьезных заболеваний.

Анализ крови серологический

В наше время есть достаточно много анализов, которые нам по жизни приходится сдавать. В этой статье рассмотрим такой вида анализа, как анализ крови на серологию.

Этот анализ проводится для того, чтобы дать ответ на вопрос есть ли у человека какие либо инфекционные заболевания и все ли у него в порядке со здоровьем.

Инфекционные заболевания также могут передаваться половый путем, и именно такие заболевания может определить серологический метод исследования крови.

Анализ кала на копрологию: подготовка к сдаче и расшифровка результата

Анализ кала на копрологию является довольно доступным способом выявить довольно широкий перечень проблем, которые могут влиять на работы желудочно-кишечного тракта. Стоит внимательно относится к подготовке к этому анализу и следовать всем наставлениям врача, для максимальной точности результата.

Анализ крови на паразитов: достоверные способы диагностики

Анализ крови на паразитов помогает определить наличие в организме человека разрушительных микроорганизмов. Но одним только стандартным анализом крови нельзя обойтись. Разновидности анализов имеют свои недостатки и преимущества, а также могут отличаться по уровню их эффективности и информативности.

Норма уровня сахара в крови

В данной статье рассказывается о том, каким должен быть в норме уровень содержания сахара в крови, а также с помощью каких исследованиях он определяется. Приводится информация о повышенном (гипергликемия) и пониженном (гипогликемия) количестве глюкозы в крови, по каким причинам развиваются эти состояния.

Как собирать общий анализ мочи? Как собирать общий анализ мочи? Этот вопрос возникает у пациентов, которым врач назначил этот вид обследования. Для постановки точного диагноза важно, чтобы моча для анализа была собрана правильно. Как это сделать, какой объем мочи нужен и как ее хранить до доставки в клинику, читайте в этой статье.
wbc анализ крови

В этой статье вы узнаете о том, что такое общий анализ крови, как расшифровываются такие аббревиатуры как wbc и rbc. Что нужно сделать перед сдачей анализа, чтобы получить достоверные результаты. Какие нормы характерны для каждого вида клеток, как они влияют на организм человека, какие заболевания вызывают.

Лабораторная диагностика – способ обследования больного. Ее проведение дает возможность предупредить развитие ряда заболеваний и назначить точное медикаментозное лечение при их наличии. В современной медицине существуют различные виды лабораторной диагностики, которые имеют свое назначение.

Ранняя диагностика заболеваний – это хороший способ предупредить, минимизировать риск развития каких-либо осложнений и облегчить течение болезни. С этой целью проводят лабораторные исследования.

Современная клинико-лабораторная диагностика – это большой комплекс работ, в который входит осмотр больного, а также дополнительные методы обследования с применением особого оборудования.

Значение диагностики

Лабораторная диагностика заболеваний является незаменимым помощником доктора при постановке верного диагноза. Современные условия позволяют использовать новые медицинские технологии для сдачи тех или иных анализов.

Важным элементом общего процесса оказания качественной медицинской помощи является именно правильное проведение лабораторного обследования. На получение точных результатов влияют:

  • Профессионализм медицинского персонала;
  • Высокая оснащенность лаборатории современным оборудованием;
  • Постоянное усовершенствование технологий;
  • Правильная подготовка больного к проведению исследованию;
  • Соблюдение процесса забора крови и сбора биологического материала;
  • Организация правильной доставки анализов. 

Согласно данным Всемирной организации здравоохранения, на всю часть лабораторных исследований приходится от 75 до 90% общего количества медицинских исследований, которые применяют в клиниках и других лечебных учреждениях. Сдача анализов – это наиболее распространенный метод исследования.

В современной лаборатории есть возможность провести множество анализов, которые позволяют диагностировать и оценить эффективность лечения того или иного заболевания. Для проведения любых лабораторных исследований применяется биологический материал пациента.

В ряде случаев лабораторная диагностика с помощью результатов, полученных после исследования биологических жидкостей больного, выполняет основную роль в определении точного диагноза.

Когда необходимо проведение лабораторной диагностики?

Проведение лабораторной диагностики требуется несколько раз:

  • Для определения типа заболевания;
  • В процессе лечебного процесса;
  • С целью контроля за ходом выздоровления;
  • После завершения лечения с целью подтверждения полного излечения.

Современная медицина находится на таком уровне, что множество болезней, даже самых серьезных, можно вылечить на ранней стадии. Поэтому является важным своевременно выявить нарушения в работе организма и соответствующие им симптомы и обратиться к врачу.

О биопсии, ее видах и проведении вы можете прочитать в этой статье. Для чего необходимы генетические исследования смотрите здесь. 

Виды лабораторной диагностики

Лабораторная диагностика в медицине представлена многочисленными методиками. Они постоянно расширяются. Различные анализы лабораторной диагностики позволяют определить какие-либо изменения в состоянии человека, нарушения в функционировании внутренних органов и систем.

Анализы крови

Общий анализ крови больного дает возможность определить:

  • Количество гемоглобина в крови;
  • Количество тромбоцитов, эритроцитов и лейкоцитов;
  • Скорость оседания эритроцитов.

Биохимический анализ крови – это современная лабораторная диагностика, с помощью которой можно определить:

  • Функциональное состояние внутренних систем организма;
  • Уровень половых гормонов;
  • Количество гормона, вырабатываемого в щитовидной железе;
  • Наличие беременности у женщин.

Для общего анализа крови специалист клинической лабораторной диагностики забирает у пациента кровь из пальца, для биохимического – из вены. 

Маркеры опухолей

Данный вид лабораторного исследования заключается в выявлении определенных веществ в организме, которые вырабатываются при различных видах опухолей.

Клиническая лабораторная диагностика посредством проведения этой методики позволяет определить новообразование в организме на начальной стадии, когда другими способами это сделать невозможно.

При данном виде обследования кровь забирается при помощи иглы без шприца или посредством применения вакуумной системы из вены. Проводится обследование натощак. Важно, чтобы после последнего приема пищи прошло 8 и более часов.

Анализ мочи

С помощью общего анализа мочи врач имеет возможность:

  • Оценить функционирование почек и других внутренних органов и систем;
  • Выявить процесс воспаления в мочевой системе.

Для проведения обычного анализа пациент должен собрать мочу утром в чистую посуду. Перед сбором обязательно проводятся гигиенические процедуры.

Бактериоскопические методы лабораторной диагностики

Данный метод предполагает исследование общего мазка на флору из:

  • Шейки матки;
  • Заднего свода влагалища;
  • Мочеиспускательного канала;
  • Прямой кишки;
  • Секрета предстательной железы.

Биоматериал рассматривают под микроскопом. Этот вид лабораторной диагностики является одним из наиболее старых, поэтому нередко его заменяют более современными методиками. 

Бактериологический посев

Полученный биологический материал помещают в определенную питательную среду. Это способствует активному размножению бактерий и позволяет выявить причину заболевания.

С помощью бактериологического посева также можно проверить, какой препарат лучше воздействует на найденного возбудителя. С этой целью делают тесты для определения чувствительности к воздействию тех или иных антибактериальных препаратов.

ПЦР

Современная клиническая лабораторная диагностика представлена такой методикой, как ПЦР. Она наиболее актуальна для определения инфекций, которые передаются половым путем. Это:

  • Хламидии;
  • Уреаплазма;
  • Микоплазма;
  • Гонококк;
  • Гарднерелла.

Для проведения ПЦР у пациента забирают кровь из вены либо берут биологический материал.

Медицинская лабораторная диагностика важна не только для определения вида заболевания. С помощью ее методов и полученных результатов доктор составит наиболее эффективную схему лечения.

Источник: http://labmed24.ru/laboratornaya-diagnostika

Лабораторная диагностика бактериальных инфекций – Инфекций.НЕТ

Методы лабораторной диагоностики

Методы лабораторной диагностики инфекций делят на прямые (определение антигенов или нуклеиновых кислот возбудителя) и непрямые (определение антител к возбудителю).

Основные методы, используемые для лабораторной диагностики бактериальных инфекций, – это прямая микроскопия, культуральный метод, иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Материалом для исследования являются биологические жидкости организма – чаще кровь, моча, ликвор, слизь из зева или носа, вагинальный или шеечный соскоб, соскоб из уретры, реже синовиальная жидкость, слюна.

Прямая микроскопия (на стекле приготавливают мазок из материала и рассматривают его под микроскопом) предварительно позволяет быстро сориентироваться в этиологии патологического процесса.

Культуральный метод (посев материала на среды с последующей идентификацией возбудителя в подросших колониях) является одним из самых точных методов лабораторной диагностики, но для его выполнения требуется значительное время (несколько дней, для выделения туберкулезной палочки – недели). Возможна полуколичественная оценка содержания возбудителя в материале, а также определение его антибиотикорезистентности.

При ИФА определяют находящиеся в биологической жидкости суммарные антитела и/или антигены бактерий путем связывания их со специфическими антигеном/антителом, сорбированными на твердой фазе и меченными ферментом, с последующим расщеплением хромогена и регистрацией результата. Выявляются как суммарные антитела, так и антитела различных классов (IgM, IgG, IgA). Возможно установление титра антител к возбудителю.

При проведении РИФ определяют антигены возбудителя путем связывания их со специфическим антителом, меченным флюоресцентным агентом с последующей детекцией свечения под микроскопом.

Из быстрых тестов для определения бактериальных возбудителей наиболее часто используют реакцию латекс-агглютинации.

ПЦР подразумевает определение нуклеиновых кислот (РНК или ДНК) возбудителя в биологических жидкостях. Возможна полуколичественная оценка содержания возбудителя в материале и определение его генетических характеристик (например, антибиотикорезистентности).

Факторы, влияющие на результаты лабораторных анализов

На результат лабораторного анализа влияют многие факторы, связанные как непосредственно с качеством лабораторной диагностики (диагностическая чувствительность и специфичность метода и используемых тест-систем), так и с правильным выбором метода лабораторной диагностики (исходя из представлений о биологии возбудителя и течения инфекции) и с правильными забором, хранением и транспортировкой материала в лабораторию.

Ошибки лабораторной диагностики

ОшибкиСуть ошибкиПричины ошибки
«Врачебные»Неверно выбранная диагностическая стратегия обследования больного или неправильная интерпретация результатов диагностикиНеверные представления о биологии исследуемого инфекционного агента или о возможности метода диагностики
«Лабораторные»Получение ложноположительного или ложноотрицательного результатаНарушение правил забора, хранения и транспортировки проб, или ошибки при исследовании непосредственно в лаборатории

Чувствительность – вероятность получения положительного результата теста у больных пациентов (истинно положительного результата). Рассчитывается как отношение количества людей с истинно положительной реакцией на этот тест при наличии у них какого-либо заболевания к общему числу больных этим заболеванием людей (имеющих и истинно положительные, и ложноотрицательные ответы).

Специфичность – вероятность получения отрицательного результата теста у здоровых пациентов (истинно отрицательного результата). Рассчитывается как отношение количества здоровых людей, у которых имеет место отрицательная реакция на тест к общему числу здоровых людей (имеющих и истинно отрицательные,  и ложно положительные ответы).

Положительная предсказующая ценность – вероятность заболевания в процентах при положительном результате теста.

Отрицательная предсказующая ценность – вероятность отсутствия заболевания при отрицательном результате теста.

Интегральная оценка эффективности диагностики (диагностической чувствительности и специфичности) проводится по ROC-кривой (с вычислением AU ROC и 95% доверительных интервалов к ней).

Особое значение имеет осуществление правильного забора, хранения и транспортировки материала.

Наиболее требовательным является культуральный метод – необходима быстрая доставка материала в лабораторию и обязательное сохранение жизнеспособности возбудителя.

Для постановки ИФА, ПЦР возможно хранение замороженной плазмы крови. В фиксированном препарате можно проводить микроскопию, в т.ч. флюоресцентную (РИФ).

Ошибки на этапе забора, хранения и транспортировки материала

наименование ошибкипричина ошибкиследствие ошибкиспособыпредотвращения
загрязнение пробы на стадии забора материалаиспользование при заборе пробы инструментария, пробирок, перчаток и других материалов, загрязненных посторонней НКложноположительный результатиспользование одноразового инструментария и материалов; повышение образовательного уровня медперсонала
загрязнение пробы примесями, ингибирующими ПЦРпроба содержит примеси ингибиторов ПЦР (гемоглобин, гепарин и другие)ложноотрицательный результатиспользование одноразового инструментария и материалов; соблюдение правил забора материала
забор материала выполнен неадекватнонесоблюдение правил забора материала (например, вместо соскоба клеток собрана поверхностная слизь)ложноотрицательный результатсоблюдение правил забора материала (например, использование специальных щеточек-зондов)
разрушение НК при транспортировке и хранении пробынесоблюдение правил транспортировки и хранения пробложноотрицательный результатсоблюдение правил транспортировки и хранения проб

Достоинства и недостатки различных методов лабораторной диагностики бактериальных инфекций

Каждый из используемых методов лабораторной диагностики обладает определенными достоинствами и недостатками, и занимает свою нишу в диагностическом процессе. Зачастую для диагностики требуется комбинированное использование нескольких лабораторных методов.

МикроскопияИФАРИФКульту-ральныйПЦР
Что определяет методнепосредственно возбудителя (прямой)антитела или антигены (непрямой)антигены (прямой)непосредственно возбудителя (прямой)нуклеиновую кислоту (прямой)
Сложность проведения методапростойсложныйсложныйсложныйсложный
Быстрота получения результатабыстроотносительно быстроотносительно быстромедленноотносительно быстро
Чувствительностьнизкаявысокаяудовлетворительнаявысокаяочень высокая
Специфичностьнизкаяудовлетворительнаянизкаяочень высокаяочень высокая
Субъективность интерпретации результатовсубъективныйобъективнаяочень субъективнаячаще субъективнаяобъективная

Источник: http://www.infekcii.net/laboratornaya-diagnostika-bakterialnyx-infekcij/

Методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний животных – статьи специалистов ИВЦ МВА им. К.И. Скрябина – ИВЦ МВА

Методы лабораторной диагоностики

Радюк Екатерина Васильевна – врач-лаборант ИВЦ МВА

Инфекционные заболевания весьма часто встречаются в ветеринарной практике. Для владельца животного важно вовремя обратить внимание на симптомы недомогания питомца.

Для большинства инфекционных заболеваний эти симптомы неспецифичны: угнетение, отказ от корма, повышенная температура тела,  рвота, понос; при некоторых заболеваниях встречается хромота и опухание суставов; возможно изменение цвета мочи.

Для ветеринарного врача, к которому приводят заболевшее животное, важно составить список дифференциальных диагнозов и исключить (или подтвердить) их специальными методами диагностики.

Однако стоит помнить, что выбор диагностического метода будет зависеть от вида возбудителя, его локализации и стадии заболевания.

Методика, применимая для диагностики одной инфекции, совершенно неприемлема для диагностики другой.

В данной статье представлен обзор основных методов диагностики инфекционных заболеваний, которыми располагает современная ветеринарная медицина.

1. Культивирование

Целью данного метода является изоляция возбудителя и получение его чистой культуры на специальной среде в оптимальных условиях. Наряду со световой микроскопией культивирование микроорганизмов является «классическим» методом диагностики.

Успешное выделение и культивирование возбудителя из клинического материала позволяет подтвердить этиологию заболевания на ранних сроках до появления специфических антител и идентифицировать возбудитель.

Однако у этого метода есть свои, достаточно значимые для клинической практики, ограничения.

Возбудители многих заболеваний, как правило, достаточно требовательны к питательным средам и достаточно сложны для культивирования invitro. Не для всех возбудителей определены условия культивирования.

В некоторых случаях используют синтетические или полусинтетические среды – однако при этом рост возбудителей очень медленный (до нескольких месяцев) и всегда присутствует значительный риск грибковой или бактериальной контаминации, несмотря строгое соблюдение асептики.

Кроме того, проведение работ по культивированию возможно только в специализированных микробиологических лабораториях.

Поэтому в ветеринарии данный метод не нашел широкого применения при диагностике инфекционных заболеваний; работы, связанные с культивированием возбудителей, проводятся, как правило, только в специальных исследовательских институтах с целью их более детального изучения и разработки диагностических тест-систем.

2. Световая микроскопия

1) Микроскопия фиксированных окрашенных препаратов

Является наиболее доступным и потому распространенным методом диагностики инфекционных (особенно трансмиссивных) заболеваний в ветеринарной медицине. Основан на выявлении возбудителя в клиническом материале по характерной морфологии. Однако, несмотря на свою простоту и доступность, у этого метода есть свои недостатки.

Во-первых, у метода световой микроскопии достаточно ограниченная чувствительность. При незначительном количестве возбудителей в материале результат микроскопии может быть отрицательным.

Во-вторых, необходимо тщательное приготовление и окраска мазков для минимизации возможных артефактов.

В-третьих, лаборанту или врачу, интерпретирующему мазок, требуется достаточный опыт и хорошее знание морфологии как клеток тканей, так и возбудителей и умение отличать последних от возможных рефракционных артефактов или преципитатов красителя.

И, в-четвертых, точное определение вида возбудителя при использовании только световой микроскопии возможно далеко не всегда.

Поэтому световую микроскопию стараются дополнять другими методами диагностики, основанными на обнаружении специфических антител либо генетического материала возбудителя.

2)Темнопольная микроскопия

Вид оптической микроскопии, в которой контраст изображения увеличивают за счет регистрации только света, рассеянного изучаемым образцом. Как правило, используется для обнаружения спирохет –  боррелий и лептоспир.

Из-за необходимости наличия специального оборудования в рутинной ветеринарной практике применяется редко.

Кроме того, с помощью темнопольной микроскопии невозможно определить видовую принадлежность возбудителя и его патогенность. 

3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод ферментативного получения ампликонов (большого количества копий) исследуемых фрагментов ДНК путем повторных циклов репликации и денатурации (разделения цепи ДНК на отдельные нити); при этом происходит копирование только исследуемого участка ДНК (при условии его присутствия в данном образце), поскольку только этот участок соответствует заданным условиям.

Метод ПЦР идеально подходит для обнаружения микроорганизмов, трудно визуализирующихся, медленно растущих или сложных в культивировании. ПЦР является наиболее предпочтительным методом для диагностики заболевания в острый период.

Основным лимитирующим фактором при использовании ПЦР является содержание в исследуемой пробе достаточного количества материала (нуклеиновой кислоты возбудителя).

Для многих возбудителей известно, что их количество в крови меняется с течением времени; таким образом, в какой-то момент времени ПЦР может показать ложноотрицательный результат у инфицированного пациента.

Таким образом, для врача крайне важно знать тропность возбудителя к тканям организма и отправлять на исследование тот материал, в котором вероятность обнаружения возбудителя наиболее высока (например, мочу – при диагностике лептоспироза, плаценту или пунктат семенников при подозрении на бруцеллез, синовиальную жидкость  – при исследовании на боррелиоз).

К техническим недостаткам этого метода можно отнести возможность ложноотрицательных результатов из-за присутствия ингибиторов реакции в пробе, а также возможность ложноположительных результатов вследствие контаминации. Кроме того, данный метод не всегда подходит для оценки эффективности лечения, поскольку ПЦР выявляет как живые микроорганизмы, так и их «останки».

4. Серологические методы диагностики

Данные методы основаны на выявлении у животных специфических антител.

Заражение инфекционным агентом, если оно происходит впервые, в течение недели вызывает у животного умеренный рост иммуноглобулинов класса М (IgM) и постепенное увеличение иммуноглобулинов класса G (IgG), которое достигает пика через 14 дней.

Определение уровня антител у животных с остро начинающимся заболеванием  (таким как бабезиоз) дает мало полезной диагностической информации. Для диагностики хронических заболеваний (например, моноцитарного эрлихиоза) измерение уровня антител будет более полезным. 

Продукция антител у каждого животного может сильно варьироваться; этот процесс зависит от возраста, иммунного статуса и генетической принадлежности. Лучший способ оценки степени сероконверсии заключается в исследовании парных сывороток, взятых с интервалом в 2-3 недели.

Растущий титр антител указывают на недавнюю и, следовательно, клинически значимую инфекцию, особенно если это подтверждается соответствующими клиническими признаками.

  Альтернативным методом определения недавней инфекции является измерение уровня IgM, однако в ветеринарной практике данный метод практически не используется.

1)  Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA)

Принцип метода заключается в том, один их специфических реагентов (антиген) иммобилизуют на твердой фазе. Затем последовательно добавляют другие специфические реагенты, проводя после инкубации каждого из них промывку с целью удаления несвязавшихся компонентов.

Один из специфических реагентов, так называемый конъюгат, содержит ферментную метку. Для визуализации результата в конце реакции добавляют хромогеновый субстрат. Через определенный промежуток времени реакцию останавливают и проводят считывание на спектрофотометре.

Для определения титра антител в сыворотке готовят несколько последовательных разведений; титр антител определяется как обратный последнему видимому разведению (к примеру, если последнее разведение было 1:2000, то титр антител составит 2000).

Метод твердофазного ИФА является наиболее предпочтительным для определения наличия антител к возбудителям, антигены которых легкодоступны (т.е. это либо легко культивируемые микроорганизмы, либо те, для которых получены рекомбинантные антигены).

Кроме того, он может использоваться и для выявления антигенов возбудителя – например при диагностике инвазии Dirofilariaimmitisили вируса лейкемии кошек.

Для использования полноценного твердофазного иммуноферментного анализа необходимо наличие специального лабораторного оборудования. Однако существует экспресс-модификация ИФА (SNAP, IDEXX Laboratories), где антиген/антитела иммобилизированы не на плашке, а на мембранном фильтре.

Эти тесты широко используются в клиниках для диагностики трансмиссивных заболеваний (лейшманиоза, дирофиляриоза, анаплазмоза, эрлихиоза и боррелиоза). Однако они не дают возможность зафиксировать рост или снижение титра антител, а также определить их принадлежность к M или G классу.

2) Метод флюоресцирующих антител (МФА, IFA)

В случае, когда культивирование микроорганизма сопряжено с техническими сложностями либо небезопасно, применяют метод иммунофлюоресценции. При этом может быть обнаружен как сам организм в зараженных клетках и тканях пациента (прямой МФА) либо наличие в сыворотке специфичных антител (непрямой МФА).

В непрямом МФА зараженные клетки (как правило, культурального происхождения) зафиксированы на предметных стеклах либо планшетках. Сама процедура исследования схожа с таковой в ИФА. Однако в конъюгате вместо фермента здесь используется специальный краситель, дающий при определенной длине волны флюоресцентное свечение, которое можно видеть в специальный микроскоп.

Количество антител также определяется по последнему разведению, давшему положительный результат.

Прямой МФА считается менее чувствительным; используется в тех случаях, когда число зараженных клеток невелико (например, для выявления в мазках крови морул Anaplasmaphagocytophilum).

3) Иммуноблот (вестерн-блот)

Представляет собой метод, при котором возможна визуализация взаимодействия антител с каждым антигеном в отдельности. Антигены возбудителя отделяются друг от друга с помощью электрофореза, а затем в виде полос наносятся на специальную мембрану (обычно нитроцеллюлозную).

 Дальнейшие стадии аналогичны таковым в ИФА. Для детекции результатов обычно используют иммунопероксидазный метод; при этом комплексы антиген-антитело визуализируются как отдельные темные полосы.

Таким образом, можно понять, на какие именно антигены возбудителя в организме животного выработались антитела. Наибольшее значение метод иммуноблоттинга имеет при диагностике клещевого боррелиоза (болезни Лайма), поскольку  метод ИФА при этом часто дает ложноположительные результаты.

  Кроме того, этот метод считается «золотым стандартом» при диагностике вирусного иммунодефицита кошек.

4) Иммунохроматография (ИХА, «экспресс-тесты»)

По этому принципу сделано большое количество «быстрых тестов», широко используемых в ветеринарных клиниках. Полученная от животного сыворотка наносится на мембрану, содержащую связанный с молекулами золота антиген.

Специфичные антитела в сыворотке связываются с антигеном; образовавшийся в результате комплекс антиген-антитело продвигается с током жидкости по тестовой зоне, пока не достигнет матрикса, который его связывает. Данный комплекс выглядит как розовая полоса в зоне преципитации.

Аналогично выглядит положительный контроль. Результат, выдаваемый тестами, как правило, является качественным – то есть нарастание или снижение уровня антител по ним отследить невозможно.

Некоторые тесты (например, для диагностики парвовирусного и коронавирусного энтерита, лейкемии кошек, сердечного дирофиляриоза) выявляют наличие в сыворотке соответствующего антигена – в таком случае результат является качественным.

Таким образом, в статье были рассмотрены основные методы, применяемые сегодня для диагностики инфекционных заболеваний животных.

Особое внимание хотелось бы уделить тому, что не существует какого-либо универсального метода для диагностики того или иного заболевания.

Поэтому от врача при постановке диагноза требуется комплексный подход; необходимо учитывать анамнез, длительность заболевания, клинические признаки и данные общих лабораторных исследований.

Кроме того, необходимо умение правильно интерпретировать результаты – ведь даже обнаружение антител (особенно класса G) к тому или иному возбудителю не говорит о том, что именно этот этиологический агент является причиной нынешнего состояния животного. Только грамотное применение и интерпретация специальных методов исследования (не только при диагностике трансмиссивных заболеваний)  в сочетании с клинической картиной дает возможность правильно поставить диагноз и назначить адекватное лечение.

Вернуться к списку

Источник: http://vetacademy.ru/obuchenie/stati/metody-laboratornoy-diagnostiki-infektsionnykh-zabolevaniy-zhivotnykh/

Принципы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний

Методы лабораторной диагоностики

Существуют прямые и косвенные методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний.

С помощью прямых методов лабораторной диагностики в биологическом материале (крови, моче и проч.) выявляются микроорганизмы, их антигены или ДНК.

Прямые методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний:

  • бактериоскопия (микроскопия) – выявление возбудителя под микроскопом
  • прямая или косвенная иммунофлюоресценция антигенов – под микроскопом видно свечение на поверхности возбудителя, который был предварительно обработан специальными веществами
  • выявление ДНК – метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)
  • бактериологический метод — выделение возбудителя на питательной среде (бактерии) или культуре клеток (вирусы).

Косвенные методы диагностики лабораторной диагностики инфекционных заболеваний

Типичными косвенными методами диагностики лабораторной диагностики инфекционных заболеваний являются серологические исследования, в основе которых лежит определение специфических к возбудителю инфекции антител:

Для сравнения качества, надежности и достоверности различныхметодик используют понятие диагностической специфичности и чувствительности, объективности и субъективности.

Чувствительность — вероятность получения положительного результата исследования при имеющейся болезни (результат одинаковый с истинным). Чем выше чувствительность метода, тем больше шансов диагностировать болезнь с первого раза, но и им чаще можно получить ложноположительный результат у здорового человека (гипердиагностика).

Специфичность — вероятность получения отрицательного результата при отсутствии болезни. Чем выше специфичность метода, тем чаще можно получить ложнонегативный результат у больного человека (гиподиагностика).

В рутинной практике под специфичностью преимущественно понимают степень соответствия между полученным результатом и истинным состоянием.

Чем больше специфичность, тем больше уверенность в том, что обнаружен истинный, именно тот показатель, который исследовали, например, антиген или антитело конкретного возбудителя.

Высокая чувствительность метода позволяет выявить болезнь, а высокая специфичность — подтвердить правильность результата.

Субъективность — восприятие результатов анализов и непосредственно человеком, без использования аналитического оборудования. Субъективные методы исследования (микроскопия, неаппаратные серологические исследования) преимущественно имеют два варианта результатов — положительный и отрицательный. Точность ответа в таких случаях сильно зависит от опытности и знаний лаборанта.

Объективность — восприятие результатов анализов посредством аналитического оборудования, например ИФА-анализатора, спектрофотометра, различных датчиков. Такие методики более точные, результаты представляются в числовом диапазоне.

Культуральный метод (выращивание бактерий на питательных средах – бактериологический посев мочи, крови) обеспечивает высокую специфичность анализа, однако имеет ряд недостатков:

  1. трудоемкость
  2. продолжительность выполнения исследования (в течение 1-5 и более суток)
  3. большие материальные затраты и привлечения высококвалифицированных специалистов

Бактериоскопический метод (световая микроскопия) имеет низкую специфичность и чувствительность по сравнению с прямой иммунофлуоресценцией и ПЦР.

Иммунофлюоресцентные методики (прямая имунофлюоресценция — ПИФ, непрямая иммунофлюоресценция — НПИФ) основаны на феномене свечения специального красителя при люминесцентной микроскопии.

Методы ПИФ и НПИФ похожи, и отличаются только техникой обработки препаратов реактивами. При методе ПИФ образец биоматериала обрабатывается меченными флюорохромом антителами сразу, за один раз.

 При методе НПИФ постановка реакции проводится в два этапа: сначала препарат обрабатывают специфическими немечеными антителами, в результате чего образуется комплекс антиген-антитело, с которым на втором этапе реагируют меченные флюорохромом антитела.

Чувствительность и специфичность этих разновидностей флюоресцентного метода не отличаются и составляют 80-95%.

Методом ПИФ предусмотрена диагностика хламидиоза, уреаплазмоза, микоплазмоза, методом НПИФ — вируса простого герпеса, цитомегаловируса, гонореи, трихомониаза и других инфекций.

 Выполнение этих методик предусматривает специальную подготовку как врача, который должен правильно провести забор материала так и врача-лаборанта, который должен правильно выполнить обработку материала и оценить результат с минимальной субъективностью.

Титр антител — полуколичественное выражение содержания неспецифических антител в сыворотке крови в виде дроби, где показана наибольшая степень разведения исследуемой сыворотки, при которой анализ дает положительный результат.

Так, обычно, используется серия последовательных двукратных разведений, значение титра выходят кратными 2: 1:2, 1:4, 1:8 … до 1:100, 1:200, 1:400 и т.д. Чем больше знаменатель дроби, тем выше концентрация антител в пробе.

Современная постановка иммуноферментного анализа проводится на анализаторах оптической плотности пробы, где вместо титра используют количественный показатель, выраженный в международных единицах (MO, IU), или единицах те оптической плотности (ОП), иммуноферментных единицах (IEU) или в нанограммах на литр.

Традиционно под титром антител понимают их количество в сыворотке крови независимо от единиц измерения.

Критическая оптическая плотность (контрольный уровень оптической плотности) — величина, которая рассчитывается по специальным формулам выполнения контрольных проб каждой тест-системы. Согласно значению оптической плотности критической определяется степень положительности исследуемых проб.

Результат исследования считается положительным, если он превышает значения оптической плотности критической на определенную величину, которая зависит от вида тест-системы.

Все расчеты ведутся в лаборатории, после чего выдается значение результата – положительный, сомнительный, отрицательный и цифровой показатель пробы.

На практике критическую оптическую плотность часто называют «нормой» и записывают «N =…».

Серая зона — это диапазон низких концентраций специфических антител, от уровня критической величины к положительному результату анализа. В серую зону с равной вероятностью могут попадать как положительные, так и отрицательные пробы.

Результаты анализа, соответствующие серой зоне, преимущественно обозначаются как сомнительные, и не могут быть однозначно интерпретированы. Поэтому, для уточнения результата, необходимо повторить исследование с новым образцом сыворотки, прикрепленные через 1-2 недели, или провести дообследование по другой методике, в частности ПИФ, ПЦР.

Источник: http://pro-analizy.ru/principy-laboratornoj-diagnostiki-infekcionnyx-zabolevanij/

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.