Умеренно чувствительные штаммы

Содержание

Проба на чувствительность к антибиотикам

Умеренно чувствительные штаммы

Что такое чувствительность к антибиотикам? Некоторые люди ошибочно предполагают, что это выражение указывает на аллергию к тому или иному препарату. Однако чувствительность микроорганизмов к антибиотику означает, что они погибают под его воздействием. Для того чтобы узнать, какой антибиотик эффективно справится с возбудителем того или иного заболевания, делается так называемый посев.

Каждый вид возбудителей обладает чувствительностью к определенному лекарственному средству, имеющему свой спектр действия, но из-за изменения экологии, появления новых антибактериальных препаратов болезнетворные микроорганизмы мутируют. Поэтому со временем может формироваться устойчивость к антибиотикам. В таком случае врачи производят замену препаратов при лечении.

Антибиотики способны спасти человеку жизнь, но они вовсе не безобидны. Неоправданное применение может нарушить работу кишечника, почек, сердца.

Если не сделать тест на чувствительность, то может применяться совершенно не тот препарат, который необходим. Болезнь побеждена не будет и потребуется подбирать другое лекарственное средство.

Антибиотики при длительном приеме почти всегда вызывают негативные побочные действия.

Как определяется чувствительность к препаратам

Чтобы определить чувствительность микроорганизма к антибиотику, нужно сделать забор биоматериала. Процесс проведения данной процедуры зависит от локализации возбудителя. Образцами биоматериала для посева могут стать:

  • кровь;
  • урина;
  • слюна;
  • грудное молоко;
  • сперма;
  • секрет простаты;
  • мазок из носа, влагалища, уретры.

При ангине берется мазок из налета, который образуется на миндалинах. Ангина вызывается грибками, вирусами, бактериями (стрептококками, стафилококками и т.д.). Ввиду такого разнообразия причин, по которым возникает недуг, для эффективного лечения требуется провести процедуру чувствительности на каждый вид возбудителя болезни.

Существует три способа определения чувствительности к антибиотикам: при помощи бумажных дисков, с помощью серийного разведения лекарства в питательной среде или серийного разведения антибиотика в агаризованной среде. Способ с бумажными дисками основан на диффузии (рассеивании) препарата в специальной среде. Концентрация средства подбирается так, чтобы диаметр зон задержки роста микроорганизмов составлял 28 — 32 мм.

Исследуемые формы бактерий или вирусов высеивают на поверхности агаризованной среды в специальном лабораторном сосуде (чашка Петри). С помощью стерильного прибора на поверхности с микроорганизмами размещают бумажные диски на одинаковом расстоянии, предварительно пропитанные раствором антибиотика. Сосуды держат в термостате при нужной температуре, чтобы был возможен рост.

Если бактерии чувствительны к раствору, то вокруг дисков наблюдается зона задержки роста бактерий. Диаметр такой зоны будет соответствовать степени чувствительности бактерий к лекарственному препарату.

Другой метод проверки чувствительности

Определить чувствительность к антибиотикам можно при помощи его разведения в жидкой питательной среде. Для проведения процедуры требуется:

  • раствор необходимых антибиотиков;
  • специальная питательная среда с оптимальными условиями роста;
  • образцы возбудителей заболевания.

Этот тест начинают с того, что в стерильные пробирки помещают по 2 мл питательной среды. В первый сосуд добавляют 2 мл лекарственного раствора и хорошо перемешивают полученный состав.

Дальше берут 2 мл этого состава и помещают во вторую пробирку, при этом перемешивая раствор. Из второго сосуда в третий и т.д. Из предпоследней лабораторной посудины 2 мл антибиотика удаляют.

При соблюдении такого способа разведения в пробирках должно находиться 2 мл раствора, но концентрация антибиотика в каждой последующей пробирке будет слабее.

В последней пробирке антибиотик не содержится. Она нужна для контроля роста возбудителя. После проделанных манипуляций с питательной средой и раствором лекарства в каждую пробирку добавляют 0,1 мл клеток.

В каждом 1 мл должно содержаться 104 — 105 клеток. После этого пробирки тщательно взбалтывают и оставляют на 20 часов в необходимой для роста температуре. Результаты исследуют сначала по просмотру содержимого в пробирках.

Определение степени помутнения показывает, каков рост бактерий.

В пробирке с наименьшей концентрацией лекарства, в которой не происходит рост микроорганизмов, содержимое будет прозрачным. Это значит, что рост возбудителя болезни сдержан, но не уничтожен.

Следующим шагом является посев содержимого, которое не помутнело, в полноценную питательную среду.

Если не наблюдается рост микроорганизмов, то это значит, что бактерии полностью погибли под воздействием данного лекарственного препарата.

Третий способ проверки на чувствительность

Реакция препаратов в агаризованной среде

Следующая проба на чувствительность к антибиотику заключается в методе серийного разведения препарата в агаризованной среде.

Такой способ имеет преимущества перед другими, потому что есть возможность в одной процедуре установить чувствительность нескольких видов организмов к лекарственному средству.

В стерильную агаризованную среду помещают лекарственный раствор с антибактериальным препаратом, взбалтывают и помещают в стерильные лабораторные посудины.

Как только агар застынет, дно чашек Петри разделяют на стора маркером. Каждый исследуемый микроорганизм засевают раствором с разной концентрацией лекарства.

Дальше чашки Петри с содержимым помещают на время от 40 до 72 часов в термостат с нужной температурой для размножения возбудителей.

Полученные результаты расшифровывают в зависимости от роста бактерий или его отсутствия по сравнению со средой в контрольной посудине. Чувствительность к антибиотику учитывается, если рост возбудителя полностью подавлен.

Благодаря развитию медицины и новых технологий существуют ускоренные методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Такие способы также помогают определить информацию о чувствительности возбудителей к лекарству. Эти методы применяются, когда требуется немедленно начать лечение антибактериальными средствами.

Обработка клинических данных

После проведения лабораторных исследований выделяют 3 категории чувствительности микроорганизмов к лекарствам:

  • чувствительные;
  • умеренно чувствительные;
  • устойчивые.

Возбудитель считается чувствительным к антибиотику, когда его рост прекращается при терапевтической дозе лекарства в крови.

Умеренно чувствительные возбудители — это те, для уничтожения которых требуется максимальная доза препарата. Под устойчивостью бактерий подразумевается, что антибиотики определенной группы не смогут победить заболевание даже при высоких дозах. При таком явлении требуется искать другой подходящий препарат.

К настоящему времени нет способов, с помощью которых можно абсолютно точно спрогнозировать терапевтический эффект лекарств данной группы в лечении инфекционных или вирусных недугов. Но те способы, что практикуются сегодня для определения чувствительности к антибиотикам, помогают выбрать правильный ориентир при назначении лечебной терапии.

Источник: https://anginynet.ru/preparaty/antibiotiki/chuvstvitelnost-antibiotikam-opredelenie-chto-znachit-proba.html

Методы определения чувствительности к антибиотикам

Умеренно чувствительные штаммы

Медицина Антибиотики: классификация, механизм действия, побочные действия. Методы определения чувствительности к антибиотикам
< Предыдущая СОДЕРЖАНИЕ Следующая >

Перейти к загрузке файла

Антибактериальную активность антибиотиков выражают в единицах действия (ЕД). Для большинства антибиотиков 1 ЕД соответствует 1 мкг химически чистого препарата. Исключение составляют пенициллин (1 ЕД = 0,6 мкг), нистатин (1 ЕД = 0,333 мкг), полимиксин (1 ЕД = 0,1 мкг), для которых сохранены единицы действия, установленные на эталонных тест-микробах до получения химически чистых препаратов этих антибиотиков.Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и другим химиопрепаратам определяют 2-мя группами методов: диско-диффузным (метод диффузии в агар с применением бумажных дисков с антибиотиками) и методом разведений антибиотика в плотной или жидкой питательной среде. Выбор метода зависит от цели исследования и возможностей лаборатории.Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам необходимо определять в каждом случае инфекции и периодически – в ходе лечения. Главным показателем чувствительности является минимальная ингибирующая концентрация – МИК (мкг/мл), т. е. минимальная концентрация антибиотика, задерживающая рост микроба-возбудителя в стандартном опыте. Значение величины МИК определяют методом серийных разведений или методом диффузии в агар (дисками или Е-тестами). В любом случае критерием чувствительности является значение величины терапевтического индекса:Т = МИК/К,где К – концентрация данного антибиотика (мкг/мл) в очаге инфекции (или в крови) при введении терапевтических доз препарата.Микроб чувствителен, а антибиотик обычно клинически эффективен при Т < 0,3. Значения К можно найти в специальных таблицах.На практике величина МИК позволяет отнести испытуемый штамм микроорганизма к одной из 3-х категорий: чувствительной, умеренно-устойчивой, устойчивой.Микроорганизм считают чувствительным, если у него нет механизмов резистентности к данному антимикробному средству и при лечении стандартными дозами инфекции, вызванной данным микроорганизмом, отмечается хорошая терапевтическая эффективность. Устойчивым к антимикробному средству считают микроорганизм, если он имеет механизмы резистентности к данному препарату и при лечении инфекций, вызванных этим микроорганизмом, нет клинического эффекта даже при использовании максимальных терапевтических доз этого препарата. К умеренно-устойчивым относят микроорганизм, если по своей чувствительности он занимает промежуточное значение между чувствительными и устойчивыми штаммами и при лечении инфекций, вызванных данным возбудителем, хорошая клиническая эффективность наблюдается только при использовании высоких терапевтических доз препарата (или при локализации процесса в местах концентрации антимикробного средства, например, в моче при мочевых инфекциях).Метод серийных разведений.Методом серийных разведений МИК определяют по минимальной концентрации антибиотика, задерживающей видимый рост микроба в пробирках или чашках с питательной средой, содержащих убывающие концентрации антибиотика. Например, для определения МИК тетрациклина в отношении культуры Staphylococcus aureus, выделенной от больного, в ряду пробирок готовят двукратно убывающие концентрации этого антибиотика в стандартном питательном бульоне, для чего содержимое пробирки перемешивается и переносится 1 мл из 2-й пробирки в 3-ю, из 3-й - в 4-ю и т. д., а из последней пробирки 1 мл удаляется (таблица).Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (МИК, мкг/мл) методом серийных разведений в бульоне.
ИнгредиентыНомер опытной пробирки (конечная концентрация антибиотика мкг/мл)Контроль
1 2 3 4 5 (64) (32) (16) (8) (4)КультурыБульоныАнтиб.
1. Бульон, мл111111
2. Раствор антибиотика (64 мкг/мл), мл111
3. Испытуемая культура/стандартизованная суспензия222222

Инкубирование в оптимальных для культуры условиях 18-24 ч.

Пример учета+++
Интерпретация результата: МИК тетрациклина в отношении испытуемой культуры – 16 мкг/мл.

Учетным признаком при этом является наличие или отсутствие мутантности бульона в пробирках. В контроле культуры должна быть мутантность, в остальных контролях – нет.

Величина МИК соответствует той минимальной концентрации, при которой отсутствует мутность (бульон в пробирках прозрачен). Так, если бульон будет мутным в 4-й или 5-й опытных пробирках, МИК тетрациклина = 16 мкг/мл.

Известно, что величина К тетрациклина при введении среднетерапевтических доз – 2 мкг/мл (при использовании максимальных доз – 10 мкг/мл). Следовательно, в данном случае терапевтический индекс будет равен Т = 16/2 = 8 (> 0,3), т. е.

возбудитель устойчив к антибиотику и лечение тетрациклином не дает антимикробного эффекта в отношении Staphylococcus aureus у данного больного даже при введении максимальных доз (Т = 16/10 = 1,6).

Метод серийных разведений считается наиболее точным, но относительно трудоемким.

Диско-диффузный метод.

При определении чувствительности методом диффузии в агар чистую культуру возбудителя засевают «газоном» на питательной агар в чашке, например, тампоном, смоченным в стандартизованной (108 КОЕ/мл) суспензии микроорганизма.

Затем на поверхность агара укладывают стандартные бумажные диски, пропитанные антибиотиками, которые диффундируют в агар, создавая градиент концентрации. На чашку диаметром 90 мм равномерно укладывают не более шести дисков с определенным количеством антибиотика.

После инкубирования в термостате измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков и по специальным таблицам определяют степень чувствительности к тому или иному антибиотику. Каждому значению диаметра зоны вокруг диска с антибиотиком соответствует определенное значение МИК.

Исходя из этих значений, для каждого антибиотика рассчитаны величины терапевтического индекса, что позволяет по диаметру зоны определить степень чувствительности к тому или иному антибиотику: чувствительные (S), умеренно-устойчивые (I) и устойчивые (R).

К категории S (от английского sensitive – чувствительный) относят те, для которых использование средних терапевтических доз будет достаточным для трехкратного превышения МИК. В категорию I (от английского intermediate – промежуточный) относят те микробы, для подавления которых потребуются максимальные терапевтические дозы. Категорию R (от английского resistant – устойчивый) составляют те микроорганизмы, в отношении которых данный антибиотик будет неэффективным.

Другие методы.

Метод определения чувствительности с помощью Е-тестов. Последние представляют собой бумажные полоски, пропитанные не одной, а рядом убывающих концентраций определенного антибиотика (128, 64, 32, 16, 8, 4,…, мкг/мл).

Е-тесты укладывают на поверхность стандартного питательного агара, засеянного испытуемой культурой в виде «газона».

После инкубирования вокруг полоски формируется элипсовидная зона задержки роста, которая сужается в области малых концентраций и «пересекает» полоску на уровне, соответствующем величине МИК.

Метод серийных разведений в планшетах. Используют готовые стерильные полистироловые 96-луночные планшеты, в лунки которых внесены и лиофильно высушены убывающие концентрации антибиотиков в бульоне.

После вскрытия планшета стандартизованную суспензию испытуемой культуры в одинаковой дозе (например, 0,1 мл) асептически вносят в соответствующие ряды лунок, закрывают крышкой и инкубируют при оптимальной температуре. Среда при этом восстанавливается, что позволяет после инкубирования планшета отметить рост (помутнение бульона) в тех лунках, где антибиотик не действует.

При помутнении бульона в контроле культуры и опытных лунках определяют величину МИК. Учет можно вести как визуально, так и с помощью специальных микробиологических анализаторов.

Метод пограничных концентраций можно считать усеченным методом серийных разведений. В соответствии с ним испытуемую культуру вносят только в две лунки (пробирки), где находятся высокая (С) и низкая (с) концентрации антибиотика.

Концентрация С соответствует границе между устойчивыми и умеренно-устойчивыми штаммами, а концентрация с – границе между умеренно-устойчивыми и чувствительными штаммами.

Если после инкубирования рост отсутствует в обеих лунках, штамм относят к чувствительным, если только в лунке с концентрацией С – к умеренно-устойчивым штаммам, а если в обеих лунках имеется рост, штамм относят к устойчивым.

Важными условиями являются:

  • – использование только чистых культур и соблюдение правил асептики;
  • – применение стандартных питательных сред, соответствующих питательным потребностям испытуемого микроорганизма (среда Миеллера-Хинтона, агар АГВ, среда НТМ и др.);
  • – внесение испытуемой культуры в стандартной дозе и соблюдение установленного соотношения инокулюм/среда;
  • – правильный режим инкубирования и метод учета.

Чувствительность к антибиотикам желательно проверять у свежевыделенных культур, выделенных из материала до начала антибиотикотерапии, и повторять исследование с культурами, выделенными в ходе лечения.

В последние годы в практике стали применять ПЦР для выявления у микробов специфических генов, ответственных за формирование лекарственной устойчивости (геноиндикация антибиотикоустойчивых культур).

Производство антибиотика пенициллина с момента его открытия в 1928 году спасло миллионы жизней. С тех пор благодаря селекции высокопродуктивных мутантных штаммов, а также разработке методов культивирования, выделения и очистки производство пенициллина возросло примерно в 2000 раз, а каждый год открываются примерно 50 новых антибиотиков.

Основными продуцентами антибиотиков являются бактерии, актиномицеты и микроскопические грибы. Бактерии, продуцирующие антибиотики, представлены в основном родом Bacillus. К антибиотикам, образуемым бактериями, относятся: грамицидин С (В. brevis), полимиксины (В. polymyxa), бацитрацины (В. licheniformis), ницины (Streptococcus Lacus).

Актиномицеты, синтезирующие антибиотики в основном представлены родом Streptomyces (S. griseus, S. fradiae, S. kanamyceticus, S. aurefaciens и др.). Антибиотики, образуемые актиномицетами, ранообразны по химическому строению: амино-гликозиды, тетрациклины, актиномицины, макролиды и другие. Грибы – продуценты антибиотиков представлены родом Renicullium и Aspergillus.

К антибиотикам, образуемым мицелиальными грибами, относятся пенициллин и цефалоспорин.

Page 3

Перейти к загрузке файла
  • 1. Н. Г. Преферанский. Фармакология. Москва «Медицина» 2004 г.
  • 2. Никитин Е. В., Киямова С. Н., Решетина О. А. Микробиология 2008 г.
  • 3. Д. А. Харкевич. Фармакология. Издательский дом ГЭОТАР – МЕД 2004 г.
  • 4. А. В. Алешукина. Медицинская микробиология. Ростов-на-Дону. Феникс. 2003 г.
  • 5. О. К. Поздеев. Медицинская микробиология учебное пособие для ВУЗ-ов М.2005 г.

  Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter

Источник: https://vuzlit.ru/836032/metody_opredeleniya_chuvstvitelnosti_antibiotikam

Посев на чувствительность к антибиотикам: расшифровка. Чувствительность к антибиотикам: суть анализа

Умеренно чувствительные штаммы

Заболевания, как серьёзные, так и не слишком, к большому сожалению, отнюдь не редкость. В борьбе с некоторыми болезнями никак не получается обойтись без антибиотиков. Их применение оценивается по-разному.

Врачи разделились на два лагеря: их сторонников и их противников. Если у вас возникла необходимость употребления антибиотиков, то прежде всего нужно узнать, как воспримет их ваш организм.

Сделать это можно с помощью посева на чувствительность к антибиотикам. Расшифровка анализа все прояснит.

Что это такое?

Эта процедура основана на том, что каждая группа микроорганизмов, обитающих в наших органах, обладает чувствительностью к какой-либо группе антибиотиков.

Чувствительность проявляется в остановке их роста и размножения, что в конечном итоге приводит к гибели этих микроорганизмов.

На основе этого анализа делается вывод о том, какие антибиотики эффективнее помогут в борьбе с конкретными бактериями.

Что представляет собой анализ, его расшифровка?

Чувствительность к антибиотикам – что это? Сейчас существует три способа определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам:

  • диффузный;
  • бактериологический анализатор;
  • серийного разведения.

Первый заключается в том, что испытуемый препарат распыляется в среду, созданную благодаря бумажным дискам.

Второй метод главным образом состоит в том, что на основе произведённого бактериологического анализа выявляется чувствительность микроорганизмов к антибиотику, результат регистрируется в специальной таблице, и происходит его расшифровка. Чувствительность к антибиотикам становится ясна для специалиста.

Третий метод признан наиболее точным. При его использовании бактерии подлежат серийному разведению в бульоне из антибиотика.

В целом, вне зависимости от избранного метода, суть анализа сводится к тому, что выделяется возбудитель болезни в чистом виде и проводится его реакция на тот или иной антибиотик, выясняется чувствительность микрофлоры к антибиотикам. Расшифровка этого анализа в данных аспектах чрезвычайно важна.

На чем он основан?

Крайне важно делать анализ на основе стерильных жидкостей органов или тканей, из которых берётся возбудитель. К ним относят:

  • кровь;
  • жидкость спинного мозга;
  • мочу;
  • микрофлору влагалища;
  • микрофлору уретры.

Результат проведённого анализа – перечень антибиотиков, к которым была или не была проявлена чувствительность у исследуемого микроорганизма. Этот результат предоставляется в форме списка, называемого антибиотикограммой. В качестве используемой измерительной единицы используется то минимальное количество лекарства, которое необходимо для уничтожения микроорганизма, вызывающего заболевание.

Условно все микроорганизмы можно разделить на три группы. Деление основывается на устойчивости к антибиотику.

Можно выделить:

  • чувствительные возбудители;
  • умеренно устойчивые возбудители;
  • устойчивые возбудители.

Для того чтобы вызвать гибель чувствительных микроорганизмов, хватит обычной дозы лекарства. Для умеренно устойчивого микроорганизма понадобится максимальная доза антибиотика. И для борьбы с устойчивыми микроорганизмами не поможет и максимально возможная доза антибиотика.

На основе результата анализа, когда проведена его расшифровка, чувствительность к антибиотикам выявлена, врач понимает, какую дозу лекарства необходимо назначить пациенту. Кроме этого, он приходит к выводу о наиболее эффективном препарате и о продолжительности курса лечения.

Однако необходимо учесть, что чувствительность возбудителя из пробирки и чувствительность возбудителя в организме могут отличаться. Это отличие заключается в количестве микроорганизмов в организме в целом.

К сожалению, не существует способа, с помощью которого можно было бы провести анализ прямо из органа.

Поэтому, несмотря на довольно высокую точность анализа, необходимо помнить о том, что выявленная чувствительность к препарату не всегда совпадает с действительной чувствительностью организма пациента. Исходя из этого, врач должен контролировать применение лекарства, чтобы лечение не проходило впустую.

Анализ на основе мочи

Как уже было сказано ранее, анализ должен проводиться на основе стерильных выделений организмов. К ним в первую очередь относится моча.

Анализы на основе мочи показаны пациентам с заболеваниями в мочевыделительной системе.

К симптомам таких заболеваний относятся:

  • боли при мочеиспускании;
  • боли в поясничном отделе;
  • нарушения в процессе мочеиспускания;
  • изменения в результатах проведённых анализов мочи;
  • реакция на применение антибиотиков в органах, отвечающих за мочевыделение.

Для того чтобы провести такой анализ, понадобится утренняя порция мочи. Её нужно собрать в специальную стерильную ёмкость. Эту ёмкость можно как купить, так и использовать любую подходящую домашнюю ёмкость, например, простую небольшую баночку. Однако перед использованием её нужно простерилизовать.

При сборе не нужно использовать первые капли мочи и последние. Именно так на анализ попадёт наиболее концентрированная микроорганизмами, если они есть, моча.

Следует предупредить врача, если за несколько дней до сдачи образца принимали антибиотики. Они могут вызвать ложный результат.

Анализ займёт до десяти дней. Продолжительность исследования зависит от микроорганизмов. За эти десять дней моча будет подвергнута ряду анализов, в результате которых врач получит представление о возбудителе заболевания, его чувствительности и об антибиотике, с помощью которого будет проведено наиболее эффективное лечение.

Анализ на основе крови

Как и анализ на основе мочи, анализ на чувствительность к антибиотикам, расшифровка его на основе крови помогает понять, есть ли у пациента возбудители той или иной болезни.

Кровь также относится к стерильным выделениям организма, она довольно часто используется в анализах.

Брать её следует до того, как пациент начал приём антибиотиков. Если сбор был осуществлён после, то результаты могут быть ложными.

Сбор производится из вены. Количество колеблется от пяти до десяти миллилитров.

После того как кровь была взята, она помещается в специальную бутыль, в которой подготовлена питательная для бактерий среда. Производится посев на чувствительность к антибиотикам. Расшифровка анализа выполняется по результатам после завершения процесса.

Итоги анализа выясняются через шестнадцать или восемнадцать часов. Время меняется в зависимости от вида возбудителя. В конечном итоге оно определяется моментом, когда его рост становится очевидным.

Так определяется тип возбудителя, после чего начинается проверка на устойчивость.

Результаты исследования крови могут быть следующими:

  • в крови нет возбудителей;
  • найден один вид возбудителя;
  • несколько видов возбудителей.

Анализ и его расшифровка, чувствительность к антибиотикам в котором указана, передаются врачу, и тот на их основании определяет тип лечения, препарат, его дозировку.

Источник: https://FB.ru/article/298630/posev-na-chuvstvitelnost-k-antibiotikam-rasshifrovka-chuvstvitelnost-k-antibiotikam-sut-analiza

Все о резистентности и методах определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Умеренно чувствительные штаммы

Резистентность к антибиотикам – это способность патогенных бактерий проявлять устойчивость к воздействию терапевтических концентраций антибактериальных препаратов. Устойчивость к антибиотикам разделяют на врожденную и приобретенную.

Под врожденной резистентностью подразумевают отсутствие у бактерии мишени, на которую может действовать применяемый антибиотик, слишком низкую проницаемость бактериальной мембраны для препарата, способность инактивировать лекарство при помощи ферментов либо активно выводить его из бактериальной клетки.

Приобретенная устойчивость возникает как следствие мутации возбудителя, благодаря которой он может свободно переносить концентрации антибиотика, достаточные для инактивации других бактерий данного вида.

Резистентность к антибиотикам

Стремительный рост устойчивости бактерий к антибиотикам представляет серьезную угрозу для здоровья и жизни людей. По статистике ВОЗ, вероятность смертельного исхода заболевания у пациента, инфицированного метициллино-резистентными штаммами стафилококка (MRSA ), на 70% выше, чем у больного, инфицированного обычными, чувствительными к антибиотикам штаммами.

Во многих странах наблюдается тенденция к росту резистентности E. Coli (основного возбудителя инфекций мочевыводящих путей) к фторхинолонам и цефалоспоринам.

Все чаще регистрируются случаи устойчивости бактерий к препаратам резерва для данной инфекции (карбапенемы для Klebsiella pneumonia, 3-е поколение цефалоспоринов для гонореи) и т.д.

То есть, те заболевания, которые на протяжении многих лет эффективно лечились антибактериальными препаратами сегодня, снова представляют опасность для населения.

В некоторых случаях, тест на чувствительность к антибиотикам показывает частичную или полную устойчивость к большинству «классических» для данной инфекции антибиотиков.

Такая неутешительная картина связана с частым нерациональным и необоснованным применением противомикробных средств.

Многие пациенты покупают лекарства не по назначению врача, а по рекомендации друзей, фармацевтов в аптеке, после просмотра рекламы или просто вспомнив, что когда-то этот препарат уже помогал.

Также, у многих существуют «любимые» лекарства, которые принимаются по несколько дней при первых признаках заболевания.

Важно понимать, что самоназначение антибиотиков, самостоятельная коррекция назначенных дозировок, кратности приема и длительности курса способствует формированию и распространению бактерий с приобретенной устойчивостью к антибиотикам.

Читайте далее: Мазок из зева на микрофлору и чувствительность к антибиотикам

Как развивается устойчивость к противомикробным препаратам?

Вторичная (приобретенная) резистентность к антибиотикам развивается за счет спонтанных мутаций в геноме микробной клетки после контакта с противомикробным средством. Важной особенностью данных мутаций является их способность «запоминаться» бактериями и передаваться следующим поколения патогенов. Это способствует быстрому распространению устойчивых штаммов в окружающей среде.

Степень резистентности (сниженная чувствительность к антибиотикам или полная устойчивость), а также скорость ее развития зависит от видов и штаммов бактерий.

Быстрее всего под действием антибиотиков мутируют:

  • стафилококки (грамположительные кокки);
  • эшерихии (грамотрицательные бактерии);
  • микоплазмы (внутриклеточные возбудители);
  • протей (грам- бактерии);
  • синегнойная палочка (грамотрицательные бактерии).

Достаточно редко встречаются  антибиотикорезистентные стрептококки группы А, клостридии, сибироязвенные и гемофильные палочки.

Среди механизмов формирования устойчивости, на данный момент наиболее важными считают:

  • ферментную инактивацию антибиотика;
  • модификацию молекул-мишеней в микробной клетке;
  • способность возбудителей активно выводить антибиотик (эффлюкс);
  • снижение проницаемости микробной мембраны для лекарства.

Поскольку активное выведение и нарушение проницаемости основаны на ограничении доступа антибиотика в бактериальную клетку, их часто объединяют в один механизм резистентности.

Что значит чувствительность к антибиотикам

В связи с ростом резистентности ко многим противомикробным средствам, определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам позволяет проводить противомикробную терапию максимально рационально и эффективно.

Итак, чувствительность к антибиотикам. Всех возбудителей инфекционно-воспалительных болезней можно разделить на:

  • чувствительные;
  • малочувствительные;
  • полностью устойчивые.

Если рост и размножение бактерий на питательной среде подавляются терапевтическими дозировками антибиотиков, то бактерии считаются чувствительными. Малочувствительные штаммы, реагируют только на максимальные дозировки лекарственного средства.

Резистентными к антибиотику считаются патогены, которые ингибируются только критически высокими дозами антибактериальных средств, достичь которых можно исключительно в условиях лаборатории, но не в человеческом организме.

Как определить чувствительность к антибиотикам?

Этиотропное назначение противомикробных препаратов основывается на выделении возбудителя с дальнейшим  определением чувствительности к антибиотикам. Этот анализ позволяет получить эпидемиологические показатели устойчивости патогенных микроорганизмов в определенном регионе, а также изучить структуру внутрибольничных и внебольничных инфекций.

При проведении пробы на чувствительность к антибиотикам, необходимо соблюдать определенный алгоритм действий и четко соблюдать все звенья бактериологической диагностики.

Этапность исследования состоит из:

  • забора материала;
  • доставки в лабораторию;
  • посевов на специальные среды;
  • выделения вида и штамма возбудителя;
  • изучения чувствительности к противомикробным средствам.

Важно понимать, что достоверные данные анализа можно получить только при правильном выполнении всех этапов диагностики.

Читайте далее: Расшифровка посева на флору с определением чувствительности к антибиотикам

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Чувствительность к антибиотикам  исследуется при помощи:

  • диффузии (диски с противомикробными препаратами или E-тесты);
  • разведения (для этого используют агар или жидкие питательные среды (бульон)).

Как сделать пробу на антибиотик?

Наиболее популярным качественным методом диагностики считается диффузия в агар с использованием метода дисков.

Для того, что бы изучить чувствительность к антибиотикам при помощи диффузии с дисками, необходимо засеять исследуемым патогенном питательную среду с агаром и поместить сверху диски с антибактериальными препаратами. Далее, чашка Петри с образцами выдерживается в термостате при температуре от 35 до 37 0С в течение суток.

По истечению 24 часов оценивают зоны ингибирования роста бактерий вокруг дисков. Данный метод диагностики является качественным, то есть диффузия-дисками определяет — чувствителен возбудитель к антибиотику или нет.

Для оценивания степени чувствительности измеряют зону ингибирования роста. При полной резистентности бактерии к антибиотику зона задержки полностью отсутствует.

О слабой чувствительности говорит задержка до 1.5 сантиметра. Препараты с такими показателями являются неэффективными для эрадикации исследуемого возбудителя.

Умеренно эффективными (показатели стандартной чувствительности) являются антибиотики с задержкой роста от 1.5 до 2.5 сантиметров. О высокой чувствительности свидетельствует зона ингибирования роста более 2.5 сантиметров.

Кроме диско-диффузного метода могут применяться полоски E-тестов. Алгоритм действий аналогичен предыдущему, только вместо пропитанных противомикробным средством дисков используют полоску с Е-тестом, содержащую разметку с градиентом концентраций изучаемого антибиотика (от максимума к минимуму).

Полоски с Е-тестом

Важно помнить, что диффузные методы неэффективны для выявления МКП (минимальные концентрации подавления) полипептидных антибиотиков с плохой диффузией в агар. То есть для полимиксина, ристомицина и т.д. предпочтительнее использовать серийное разведение.

Методы разведения

Количественные методы используются для выявления МКП и минимальных концентраций бактерицидного действия. То есть, с их помощью можно определить минимальный уровень антибиотика, который будет предотвращать видимый рост бактерий.

При помощи методов разведения можно рассчитать необходимую дозу препарата (терапевтическая концентрация в крови должна значительно превышать МКП). При использовании метода серийного разведения, вначале готовится основной р-р, со строго определенной концентрацией антибиотика в специальной питательной среде. Из него готовятся все последующие разведенные р-ры.

Далее, в каждую пробирку (чашку Петри) с разведениями добавляют изучаемую культуру возбудителей. После этого, все посевы подвергаются инкубации в термостате при температуре 370С на одни сутки. По окончанию инкубации оценивают результаты и выявляют МКП по отсутствию зоны роста (в чашке Петри) или помутнения  (среды в пробирке).

Оценивание результатов проводится при помощи специальных таблиц с стандартными показателями диаметров ингибирования роста и МКП для резистентных (для этих штаммов указывается только зона ингибирования роста), малочувствительных и чувствительных.

Читайте далее: Как сдавать посев мочи на флору и чувствительность к антибиотикам?

Источник: https://lifetab.ru/vse-o-rezistentnosti-i-metodah-opredeleniya-chuvstvitelnosti-bakteriy-k-antibiotikam/

Чувствительность бактерий к антибактериальным препаратам и бактериофагам

Умеренно чувствительные штаммы

Определение чувствительности бактерий – важная часть лечения бактериальных инфекций, поскольку эта процедура позволяет подобрать для лечения максимально эффективные антибиотики или бактериофаги. Так можно выяснить, на какие вещества колонии бактерий, выращенные in vitro, реагируют приостановкой роста или гибелью.

Родственные виды бактерий имеют некоторый естественный диапазон чувствительности к антибактериальным препаратам или их группам. Большинство бактериальных клеток имеют среднестатистическую чувствительность, характеризующую колонию.

Однако при длительном выращивании на средах, содержащих вещества, подавляющие рост и развитие бактериальных колоний, чувствительность некоторых бактерий на антибиотики снижается, а со временем при помощи маленьких кольцевых ДНК (плазмид) передается всем бактериальным клеткам.

Так возникают нечувствительные штаммы, доставляющие массу хлопот лечащим врачам.

Снижение чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам часто возникает при длительном нерегулярном приеме антибиотиков. В таком случае определение чувствительности бактерий на антибиотики становится обязательным этапом, предшествующим эффективному лечению.

Современные бактериальные культуры часто демонстрируют высокую устойчивость к бета-лактамным антибиотикам, таким как цефалоспорины и пенициллины. Это связано с тем, что такие бактерии, как Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa способны синтезировать специальные ферменты, названные бета-лактамазами расширенного спектра (БЛРС).

Различают два способа назначения антибиотиков и фагов:

  1. Эмпирическое опирается на информацию о естественной чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам или бактериофагам, на данные эпидемиологов и имеющиеся данные предварительных клинических исследований.
  2. Этиотропное основано на информации о реальной чувствительности культур, полученных из инфекционных очагов к антибактериальным препаратам, которые планируется назначать для лечения.

Варианты взаимодействия бактерий и лекарственных препаратов

Понятие чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам у микробиологов и врачей несколько различны. Это связано с тем, что концентрации веществ, допустимые при исследовании высеянных культур, могут существенно превышать те, которые допустимы для живых организмов. Различают три вида чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам:

  1. Чувствительные. Реагируют прекращением роста на стандартные дозы лекарственных веществ.
  2. Устойчивые, или резистентные. Не реагируют даже на максимальные дозы лекарственных веществ.
  3. С промежуточной резистентностью к лекарственным препаратам. Иногда такие штаммы относят у устойчивым. Их особенностью является способность прекращать рост в тех частях организма, где происходит накапливание лекарственных веществ, и не реагировать на антибиотики в других частях организма. Некоторые из таких штаммов приостанавливают рост только при применении максимально допустимых концентраций антибиотика.

Важной характеристикой антибиотика является так называемая минимальная бактерицидная концентрация. Это такая концентрация, которая способна в течение определенного времени уменьшить численность бактерий в колонии на 99,9%. Ее применяют в особых случаях – у больных остеомиелитом, бактериальным эндокардитом, при генерализованных инфекциях, возникающих у больных с пониженным иммунитетом.

Методы определения

Определение чувствительности бактериальных культур к лекарственным препаратам может проводиться как в жидких, так и в плотных средах. Чаще других применяются три метода.

Диско-диффузионный

Для его проведения используются диски, смоченные растворами антибиотиков стандартных концентраций (выбираются заранее известные средние терапевтические дозы). Они подбираются так, чтобы размеры участков замедления роста бактерий находились в соответствии с принятыми международными стандартами.

Выращивание бактерий проводится на твердых средах (агар Мюллер-Хинтона или АГВ). На них высевается взвесь бактерий, а затем кладутся бумажные диски, смоченные разными антибактериальными агентами. После этого чашки выдерживаются в термостате.

Определение чувствительности выполняют визуально, по наличию зон замедления роста около дисков. Измеряют их диаметры и по таблицам рассчитывают степень чувствительности бактериальной культуры к конкретным антибактериальным препаратам.

Данный метод неприменим к веществам, плохо проникающим в толщу агара (полимиксину, ристомицину) и не позволяет провести определение минимальной подавляющей дозы антибиотика.

Метод последовательных разведений

Состоит в подготовке питательных сред, содержащих различное количество антибиотика. Их разливают в разные чашки Петри, каждую из которых снаружи разделяют на сектора при помощи маркера.

На каждый сектор наносят разные культуры при помощи специальной петли или аппликатора. В каждую чашку можно за один раз посеять 10-15 культур. Чашки культивируют в термостате.

Контрольную чашку заливают агаром без антибиотика.

Определение чувствительности этим методом дает возможность выявить минимальные количества антибиотика, полностью подавляющие рост бактерий.

Комбинированный, или метод Е-тестов

Определение чувствительности при помощи полосок бумаги с градиентом концентраций. Полоски размещают на чашке Петри равномерно и по степени подавления роста в разных участках определяют не только чувствительность культуры к препаратам, но и их минимальные концентрации, вызывающие появление характерных эллипсоидных зон задержки роста.

Существуют стандартные наборы антибиотиков, предназначенные для работы с грамположительными и грамотрицательными бактериями, а также расширенные наборы для исследования мочи, в состав которых входят дополнительные вещества – уросептики.

Бактериофаги и лечение бактериальных инфекций

Препараты-бактериофаги – вирусы, поражающие бактериальные клетки, – часто дополняют антибиотикотерапию. Они обладают необходимой специфичностью и вызывают лизис (растворение) бактериальных клеток-мишеней. Чувствительность бактериальных культур к фагам очень сильно варьирует, поэтому ее определение является залогом эффективной фаготерапии.

Вопрос природы чувствительности бактерий к бактериофагу давно интересовал биологов различных направлений.

Существовала версия, что появление нечувствительных клеток происходит только после контакта колонии с фагами (так называемая ламарковская версия).

Другая версия, дарвиновская, предполагала, что появление фагов модулирует численность колонии, давая преимущество предсуществовавшим клеткам со случайными мутациями, устойчивым к бактериофагам.

Разновидности фагов

Различают две группы бактериофагов в зависимости от скорости уничтожения бактериальных колоний.

Умеренные

Уничтожают только некоторые бактериальные клетки, вступая с выжившими в своеобразный симбиоз. ДНК такого бактериофага встраивается в ДНК бактерии (так называемый профаг) и передается будущим бактериальным поколениям.

Такие культуры бактерий называют лизогенными – в определенный момент они дают жизнь новым свободным бактериофагам, которые переходят из нуклеоида в цитоплазму и способны лизировать бактерии соседних колоний.

При этом чувствительность к бактериофагу у лизогенной колонии отсутствует.

Вирулентные

Лизируют все бактериальные клетки, давая жизнь новым фагам, которые уничтожают колонию в течение 30-40 минут, после чего частично гибнут, а частично инкапсулируются и переходят в спящее состояние.

Как определяют чувствительность к фагам

Определение чувствительности бактериальных культур к бактериофагам проводят при помощи микробиологических методов – на твердых или полужидких питательных средах. Обычно используют один моновалентный и два поливалентных фага.

Определение чувствительности колоний к бактериофагу может использоваться для различных целей:

  1. Фаготипирование. Определение штаммов бактерий по их чувствительности к фагам. Используется при проведении эпидемиологических исследований.
  2. Фагоидентификация. Определение видов бактерий по их отношению к фагам.
  3. Фагодиагностика. Выделение фагов из организма пациента, свидетельствующее о наличии соответствующих бактерий.
  4. Фагопрофилактика. Применяется при опасности заражения дизентерией. Чувствительность возбудителей к фагам позволяет проводить эффективную профилактику в очагах этого заболевания.
  5. Фаготерапия. Наиболее часто применяется для лечения заболеваний, вызванных стафилококком, шигеллами, протеем.

Применение бактериофагов показано только в случае, если выполнено определение чувствительности к бактериофагу, иначе этот дорогостоящий метод может не дать ожидаемого эффекта. Такие препараты используют для лечения инфекций у новорожденных, гнойных ран, а также инфекций мочевыводящей системы – уретритов, пиелонефритов, циститов.

Работаю врачом ветеринарной медицины. Увлекаюсь бальными танцами, спортом и йогой. В приоритет ставлю личностное развитие и освоение духовных практик. Любимые темы: ветеринария, биология, строительство, ремонт, путешествия. Табу: юриспруденция, политика, IT-технологии и компьютерные игры.

Источник: https://probakterii.ru/prokaryotes/in-medicine/chuvstvitelnost-bakterij.html

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.